کروماتوگرافی ستون معمولی

کار آماده سازی باید به خوبی انجام شود:
هنگام انتخاب ستون ، مشاهده کنید که آیا یک تخته ماسه ای وجود دارد یا خیر. برای ستون های بدون تخته های ماسه ای ، به یاد داشته باشید که قسمت پایین را با مقداری پنبه پر کنید. پنبه نباید خیلی ضخیم یا خیلی نازک باشد ، تا زمانی که بتواند سیلیکون را از خاموش شدن جلوگیری کند. (وبلاگ نویس مستقیماً یک چوب لباسی را از بین برد و از آن برای قرار دادن پنبه در محل خروجی روی پلاگین استفاده کرد)
حداقل قطبیت قطبیت ، لامپ UV (توصیه شده برای پرسنل آزمایشگاهی ، دستی ، آماده برای گرفتن عکس در هر زمان) ، تجهیزات فشار و قفسه لوله آزمایش را در صورت لزوم تهیه کنید!

یک ستون مناسب را انتخاب کنید ، ژل سیلیکونی را اضافه کنید ، ژل سیلیکون را خیس کنید و آن را صاف کنید
انتخابکروماتوگرافی ستون معمولیبسیار مهم است ، و اندازه آنها باید بر اساس میزان محصول محاسبه شود ، که به طور کلی می تواند به آن تقسیم شود:

متداول ترین نسبت قطر ستون به ارتفاع در آزمایشگاه به طور کلی بین 1: 2.5 و 1:15 است. مقدار ژل سیلیس که به عنوان یک فاز ثابت در طول بارگذاری نمونه مورد استفاده قرار می گیرد ، حدود 20 تا 40 برابر نمونه است. استاندارد برای انتخاب ستون ها باید بر اساس وضعیت صعود صفحه TLC نمونه شما باشد. اگر ناخالصی های زیادی در نزدیکی وجود دارد ، سعی کنید تا حد امکان یک ستون بزرگتر را انتخاب کنید تا نمونه شما با یک لایه نازک کوچک (ضخامت توصیه شده زیر 5 میلی متر) پوشانده شود. اگر ناخالصی ها بسیار دور باشند ، این ضخامت به طور طبیعی قابل افزایش است ، اما توصیه نمی شود که ضخامت نمونه شما از 2 سانتی متر تجاوز کند ، مگر اینکه محصول به سادگی شسته شود.

بسیاری از افراد اشتباه می کنند که فکر می کنند اضافه کردن سیلیکون بیشتر ، حتی اگر روی نمونه من ضخیم تر باشد ، آیا می توان آن را به خوبی از هم جدا کرد؟ این پاسخ منفی است!
دلیل این امر این است که این افراد هرگز فکر نمی کردند که نمونه های زیر و بالاتر در همان خط اجرا نمی شوند ، بنابراین آنها فقط می توانند برخی از موارد خالص را بدست آورند ، که بیشتر آنها عبور می کردند ، به ذکر موارد نجس ، هدر رفتن زمان و حلال ها!

به همین دلیل نمونه نیاز به نازک شدن دارد!

پس از انتخاب ستون ، اضافه کردن سیلیکون را می توان از طریق قیف تغذیه انجام داد. در عین حال ، حتماً ماسک بپوشید و در یک هود دود کار کنید. دلیل این امر توسط وبلاگ نویس (سیلیکوز) توضیح داده نمی شود.
در مورد نفوذ ژل سیلیس ، فرآیند توصیه شده این است: ابتدا ستون ژل سیلیس را با ژل سیلیس نصب شده به صورت عمودی قرار دهید ، سطح ژل سیلیس را با دست خود صاف کنید ، قسمت پایین ستون ژل سیلیس را به پمپ آب وصل کنید ، ژل سیلیس را پمپ کرده و سپس از بالا استفاده کنید. هنگامی که Eluent در حال نشت است ، شیر خاموش را ببندید تا از پمپ شدن حلال به پمپ آب جلوگیری شود.
سپس ، تحت فشار ، ژل سیلیکون می تواند با شستشوی هفت یا هشت جلد ستون با کمترین مقدار ماده در حال توسعه به طور یکنواخت خیس شود.

نمونه بالا

سولفات سدیم بی آب یا ماسه کوارتز را اضافه کنید
به منظور جلوگیری از تأثیرگذاری بر لایه نمونه در حین افزودن القاء ، ایجاد ناهموار ، تغییر شکل و تأثیرگذاری بر راندمان جداسازی ، لایه ای از سولفات سدیم بی آب یا ماسه کوارتز به طور کلی در بالای لایه نمونه گذاشته می شود.
مهندسان ما شخصاً ترجیح می دهند سولفات سدیم بی آب را بکشند زیرا عملکرد خشک کن نیز دارد و با حلالهایی مانند دیکلرومتان که مستعد فرار ، جذب گرما و تراکم هستند دوستانه است!

شستشوی شیب ، نمونه گیری و جمع آوری
پس از بارگذاری ، ابتدا ستون را با یک حلال قطبی کوچک (حلال که به محصول اجازه عبور از آن را نمی دهد) بشویید ، برای حجم ستون 2-3 (یک حجم یک ستون به عنوان حجم فاز موبایل که در داخل و خارج جریان می یابد) تعریف می شود) برای اطمینان از یکنواختی ، و سپس یک نسبت برای ELUTION انتخاب کنید.

چگونه می توان Eluent را که از ستون عبور می کند انتخاب کنیم؟
نسبت Eluent نسبت زمانی است که محصول شما به مقدار RF در حدود 0 2 در صفحه TLC می رسد
این تجربه شستشوی ستونی است که من کتاب های زیادی را خوانده ام و به اشتراک گذاشته ام و روند واقعی نیز بسیار مشابه است. من شخصاً ترجیح می دهم شیب را دو بار کاهش دهم.
به عنوان مثال ، اگر حلال برای کوهنوردی صفحه TLC PE/EA {0}}: 1 باشد ، وبلاگ نویس بیشتر احتمال دارد که شیب شیب را از PE/EA {2}}: 1 شروع کند و در PE/EA {4}: 1 پایان یابد ، به طور کلی نتیجه بهتری حاصل می شود.

همچنین در هنگام جمع آوری Eluent تکنیک هایی وجود دارد. ابتدا می توانید یک لوله آزمایش بزرگتر را برای دریافت آن انتخاب کنید و وقتی TLC به نقطه هدف نزدیک می شود ، به یک لوله آزمایش کوچکتر بروید. این می تواند احتمال دریافت بیشتر و جلوگیری از ناخالصی ها را کاهش دهد.

اگر با موقعیت هایی روبرو می شوید که نقاط ناخالصی و نقاط محصول به هم نزدیک هستند ، به خصوص آنهایی که فلورسانس ضعیف دارند ، به یاد داشته باشید که فشار را اعمال نکنید. درعوض ، انتخاب ستون را تحت فشار عادی انتخاب کنید و هر بار که لوله های نیمی یا کمتر به هم وصل شوند ، لوله را تغییر دهید ، که می تواند احتمال تصفیه را نیز افزایش دهد.

به یاد داشته باشید که ستون را به موقع اداره نکنید!
بسیاری از افراد عادت دارند که فرض کنند این ستون منتقل شده و خشک شده است که هیچ محصولی در یک یا دو لوله بعد از TLC در مرحله بعدی وجود ندارد.
من فقط فهمیدم که وقتی آن را محاسبه کردم ، عملکرد خیلی کم است ، یا وقتی که برای ساختن طیف رفتم ، فهمیدم که این طیف نادرست است و نقطه اشتباه را از دست داده است. من عمیقاً پشیمان شدم.
بنابراین توصیه می شود پس از تکمیل نقطه مورد نظر ، به پردازش ستون عجله نکنید. در عوض ، رزونانس مغناطیسی هسته ای را انجام دهید تا قبل از پردازش با عملکرد مطابقت داشته باشد.
اگر مشغول کار هستید یا عجله دارید ترکیبات دیگر را با این کار تصفیه کنیدکروماتوگرافی ستون معمولی، توصیه می شود با یک حلال مخلوط خوش خیم قطبیت شستشو داده و این قسمت از ایلو را به طور جداگانه برای نتایج شناسایی رها کنید.